このキットは、TaqManプローブのリアルタイム蛍光PCRであり、肺炎の症状が疑われる患者の喉の綿棒、痰、クラスタリングの症例で2019-nCoVのN遺伝子核酸であるORF1abを定性的に検出します。
【使用目的】
このキットは、TaqManプローブのリアルタイム蛍光PCRであり、肺炎の症状が疑われる患者の喉の綿棒、痰、クラスタリングの症例で2019-nCoVのN遺伝子核酸であるORF1abを定性的に検出します。
テスト結果は臨床参照のみを目的としており、臨床診断のベンチマークとしてのみ見なすことはできません。臨床症状やその他の検査結果に関して、明示的な分析を行うことをお勧めします。
オペレーターは、遺伝子増幅または分子生物学的方法の試験に関する専門的なトレーニングの経験があり、実験室での操作に関連する資格を持っている必要があります。実験室は、合理的な生物学的安全予防措置と保護手順を備えている必要があります。
【テストの原則】
このキットでは、プライマーとプローブは、それぞれ2019-nCoVのNであるORF1abの保存領域と特定の領域に合わせて設計されています。蛍光PCRは、サンプルRNAの核酸精製後にウイルスRNAを検出するために使用されます。
このテストキットは、リアルタイム蛍光PCRテクノロジーを使用しています。PCR増幅中に、プローブはテンプレートに結合し、プローブの5'末端レポーターグループはTaq酵素によって切断され(5'→3'エキソヌクレアーゼ活性)、それによって消光基から離れて、蛍光シグナルを生成します。検出された蛍光シグナルに基づいてリアルタイム増幅曲線が自動的にプロットされ、サンプルのCt値が計算されます(各反応チューブの蛍光シグナルが設定されたしきい値に達したときに発生するサイクル数)。 FAM、VIC、およびテキサスレッドフルオロフォアは、反応溶液中のORF1ab遺伝子、N遺伝子プローブをマークするために利用されます。 1つのテストを使用することで、2019-nCoVの上記の2つの遺伝子の定性的検出を同時に実行できます。
偽陰性の結果を回避するために、キットには、抽出手順と反応溶液のモニタリングに使用できるCy5蛍光基でマークされた内部コントロール(IC)が付属しています。
【メインコンポーネント】
いいえ。 | コンポーネント | 材料 | 仕様 |
1 | ヌクレアーゼフリー 水 | DEPCウォーター | 1000μL×1チューブ |
2 | 核酸 増幅 反応液 | トリス-HCl,KCl,Mg2 + | 528μL×1チューブ |
3 | 逆行 転写酵素 | 逆転写酵素、RNA酵素阻害剤 | 48μL×1チューブ |
4 | オン反応 解決 | ORF1ab、N遺伝子および内部コントロールプライマーおよびプローブ | 288μL×1チューブ |
5 | 内部制御 | 人間の遺伝子断片 | 40μL×1チューブ |
6 | ポジティブコントロール (オン) | ORF1ab、Nを含む組換えベクター遺伝子フラグメント | 400μL×1チューブ |
7 | ネガティブコントロール | 生理食塩水 | 400μL×1チューブ |
8 | DNAポリメラーゼ | DNAポリメラーゼ | 50μL×1チューブ |
ノート1:異なるロットのコンポーネントは交換できません。
ノート2:テストキットには核酸抽出試薬は含まれていません。使用前に試薬を準備してください。
1.サンプルの取り扱い
核酸抽出を実行するために、10μLの内部コントロールをそれぞれ200μLのポジティブコントロールとネガティブコントロールに追加します。
2.試薬の準備:
システムの準備:フォイルポーチを開いてすぐに遠心分離することにより、プレインストールされた核酸増幅凍結乾燥機を用意します。各テストのサンプル量は、1つのポジティブコントロールと1つのネガティブコントロールを含む8の倍数である必要があります。各反応チューブに35μLのヌクレアーゼフリー水を追加します。
3.サンプルの読み込み:
テストする5μLのサンプル核酸を追加します。ポジティブコントロール、ネガティブコントロールで、割り当てられた反応溶液に反応容量全体が40μLになるようにします。微混合物を必要としないため、PCR反応チューブの蓋を閉じて遠心分離します。チューブの底にあるチューブ壁の液体、したがってPCR増幅を処理します。
検証後、PCRシステムに5μL〜10μLのパラフィンオイルを追加しても、PCRの結果には影響しませんが、汚染や液体の気化は回避されると推定されます。